Der Wiesbadener fuhr in seinem Williams-Toyota in 1:32,521 Minuten auf dem Wüstenkurs von Sachir 0,205 Sekunden schneller als Ferrari-Mann Felipe Massa.
Der Vorjahressieger aus Brasilien hatte am Vortag auf der 5,412 Kilometer langen Strecke die ersten Übungseinheiten dominiert. Dritter wurde bei 28 Grad der Australier Mark Webber im Red Bull (+0,221).
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Weltmeister Kimi Räikkönen rutschte in einer Rechtskurve von der Strecke und hielt sich danach zurück. Der Finne belegte am Ende Rang neun (+0,716).
Hamilton nur auf Rang 18
WM-Spitzenreiter Lewis Hamilton, bei dessen McLaren- Mercedes nach einem Unfall am Freitag das Chassis ausgetauscht werden musste, kam mit 1,138 Sekunden Rückstand lediglich auf Platz 18.
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Weit hinter Rosberg reihte sich der Rest des deutschen Quintetts am Ende des Feldes ein. Der Wersauer Timo Glock wurde im Toyota 15. (+1,074), Toro-Rosso-Mann Sebastian Vettel aus Heppenheim fuhr auf Rang 17 (+1,130).
Noch hinter Force-India-Pilot Adrian Sutil (Gräfelfing), der mit 1,336 Sekunden Rückstand 19. wurde, kam BMW- Sauber-Fahrer Nick Heidfeld (Mönchengladbach) auf Platz 20 (+1,553).
Das dritte Saisonrennen wird am Sonntag auf dem Kurs südlich der Hauptstadt Manama gestartet. In der WM-Wertung führt Hamilton mit 14 Punkten drei Zähler vor Titelverteidiger Räikkönen und Heidfeld.